- 移动端
上海芯超生物科技有限公司
19 年
手机商铺
商家活跃：
产品热度：
- NaN
- 0.20000000000000018
- 0.20000000000000018
- 2.2
- 2.2
公司新闻/正文
肿瘤微环境解析方案：组织多色免疫荧光
10621 人阅读发布时间：2020-01-03 13:48
组织多色免疫荧光 (mIHC) 是一套基于酪酰胺信号放大技术 (TSA，TyramideSignal Amplification) 的多标记免疫组化染色方案，为组织样品特别是石蜡组织样品进行染色，并且允许同一样本中使用同一种属来源的不同一抗进行多标记复合染色。配合多光谱成像分析系统，可以获得高信噪比的图像，甚至是多达 6 种标记的同步染色和共定位及定量分析，满足组织微环境中复杂表型分析的需求。
实验原理
1，荧光素耦合的 TSA 在 HRP 和过氧化氢的作用下被活化，跟临近蛋白的氨基酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合 [3]
由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担心抗体交叉反应，以及多指标一抗种属匹配问题，解除了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制 [4]。
实验步骤
step 1：选定待测组织、待测指标；
step 2：组化验证、单色验证；
step 3：多色荧光标记；
step 4：各通道图像采集；
step 5：数据分析（细胞类型、表达强度定量分析）和实验结果；
优势
1，荧光法多重免疫组化，可同时进行七个颜色通道以上，同一张组织切片上实现多达 6 种染色，摆脱一抗种属来源束缚，实现抗体自由选择；
2，组织原位类流式分析，单一细胞多重表达标记实现组织原位观察，增强抗体灵敏度；
3，易于设计和优化，实现超多通道同时检测 ，全景展示蛋白表达特征、节约样品等。
应用组织多色免疫荧光技术发表部分高分文献
近年，应用该技术发表了许多重量级的文章。例如：2019 年在 nature medicine 发表文章中使用多色免疫荧光检测非小细胞肺癌中 siglecl-15 和 CD68 的共表达 [1]。
2019 年 the Journal Immunology 文章报道一种由 PD-1、PD-L1、OX40、CD27、TIM3、CD3、肿瘤标志物和 DAPI 组成的八色复合免疫组化板的开发、优化和应用。[2]
芯超生物现推出多色荧光实验服务，帮助您深入解析肿瘤微环境中的蛋白或细胞的异质性分布，及其空间定位以及与组织结构的相互关系，理解各组分在组织微环境中的角色和作用。 芯超生物自推出免疫荧光以来，受广大科研人员信赖。与常规免疫组化相比，荧光法多重免疫组化，可同时进行七个颜色通道，同一张组织切片上实现多达 6 个指标的染色（DAPI）。
参考文献
[1]Wang J, Sun J, Liu LN, Flies DB, Nie X, Toki M, Zhang J, Song C, Zarr M, Zhou X, Han X, Archer KA, O'Neill T, Herbst RS, Boto AN, Sanmamed MF, Langermann S, Rimm DL and Chen L. Siglec-15 as an immune suppressor and potential target for normalization cancer immunotherapy. Nat Med 2019;
[2]Gorris MAJ, Halilovic A, Rabold K, van Duffelen A, Wickramasinghe IN, Verweij D, Wortel IMN, Textor JC, de Vries IJM and Figdor CG. Eight-Color Multiplex Immunohistochemistry for Simultaneous Detection of Multiple Immune Checkpoint Molecules within the Tumor Microenvironment. J Immunol 2018; 200: 347-354.
[3] 钱帮国，焦磊. 多标记免疫荧光染色及多光谱成像技术在组织学研究中的应用. 中 国 组 织 化 学 与 细 胞 化 学 杂 2017; Vol.26.No.4.
[4]Stack EC, Wang C, Roman KA and Hoyt CC. Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis. Methods 2014; 70: 46-58.
[5]Zaretsky, J. M., et al. (2016). "Mutations Associated with Acquired Resistance to PD-1 Blockade in Melanoma." N Engl J Med 375(9): 819-29.
[6]Nghiem, P. T., et al. (2016). "PD-1 Blockade with Pembrolizumab in Advanced Merkel-Cell Carcinoma." N Engl J Med 374(26): 2542-52.
[7]Schalper, K. A., et al. (2017). "Differential Expression and Significanceof PD-L1, IDO-1, and B7-H4 in Human Lung Cancer." Clin Cancer Res 23(2): 370-378.
实验原理
1，荧光素耦合的 TSA 在 HRP 和过氧化氢的作用下被活化，跟临近蛋白的氨基酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合 [3]
（图片引至参考文献 3）
2，经过微波处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素还留存在样品上。再换个一抗来第二轮孵育，周而复始。等到所有抗体孵育结束，荧光素都结合好后，最后检测结果。由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担心抗体交叉反应，以及多指标一抗种属匹配问题，解除了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制 [4]。
（图片引至参考文献 3）
实验步骤
step 1：选定待测组织、待测指标；
step 2：组化验证、单色验证；
step 3：多色荧光标记；
step 4：各通道图像采集；
step 5：数据分析（细胞类型、表达强度定量分析）和实验结果；
优势
1，荧光法多重免疫组化，可同时进行七个颜色通道以上，同一张组织切片上实现多达 6 种染色，摆脱一抗种属来源束缚，实现抗体自由选择；
2，组织原位类流式分析，单一细胞多重表达标记实现组织原位观察，增强抗体灵敏度；
3，易于设计和优化，实现超多通道同时检测 ，全景展示蛋白表达特征、节约样品等。
应用组织多色免疫荧光技术发表部分高分文献
近年，应用该技术发表了许多重量级的文章。例如：2019 年在 nature medicine 发表文章中使用多色免疫荧光检测非小细胞肺癌中 siglecl-15 和 CD68 的共表达 [1]。
2019 年 the Journal Immunology 文章报道一种由 PD-1、PD-L1、OX40、CD27、TIM3、CD3、肿瘤标志物和 DAPI 组成的八色复合免疫组化板的开发、优化和应用。[2]
芯超生物现推出多色荧光实验服务，帮助您深入解析肿瘤微环境中的蛋白或细胞的异质性分布，及其空间定位以及与组织结构的相互关系，理解各组分在组织微环境中的角色和作用。 芯超生物自推出免疫荧光以来，受广大科研人员信赖。与常规免疫组化相比，荧光法多重免疫组化，可同时进行七个颜色通道，同一张组织切片上实现多达 6 个指标的染色（DAPI）。
（芯超生物实验平台多色图）
参考文献
[1]Wang J, Sun J, Liu LN, Flies DB, Nie X, Toki M, Zhang J, Song C, Zarr M, Zhou X, Han X, Archer KA, O'Neill T, Herbst RS, Boto AN, Sanmamed MF, Langermann S, Rimm DL and Chen L. Siglec-15 as an immune suppressor and potential target for normalization cancer immunotherapy. Nat Med 2019;
[2]Gorris MAJ, Halilovic A, Rabold K, van Duffelen A, Wickramasinghe IN, Verweij D, Wortel IMN, Textor JC, de Vries IJM and Figdor CG. Eight-Color Multiplex Immunohistochemistry for Simultaneous Detection of Multiple Immune Checkpoint Molecules within the Tumor Microenvironment. J Immunol 2018; 200: 347-354.
[3] 钱帮国，焦磊. 多标记免疫荧光染色及多光谱成像技术在组织学研究中的应用. 中 国 组 织 化 学 与 细 胞 化 学 杂 2017; Vol.26.No.4.
[4]Stack EC, Wang C, Roman KA and Hoyt CC. Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis. Methods 2014; 70: 46-58.
[5]Zaretsky, J. M., et al. (2016). "Mutations Associated with Acquired Resistance to PD-1 Blockade in Melanoma." N Engl J Med 375(9): 819-29.
[6]Nghiem, P. T., et al. (2016). "PD-1 Blockade with Pembrolizumab in Advanced Merkel-Cell Carcinoma." N Engl J Med 374(26): 2542-52.
[7]Schalper, K. A., et al. (2017). "Differential Expression and Significanceof PD-L1, IDO-1, and B7-H4 in Human Lung Cancer." Clin Cancer Res 23(2): 370-378.